استخراج، خالص?سازی و تعیین ویژگی?های بیوشیمیایی نوع جدیدی آنزیم لیپاز از فلور میکروبی چشمه دیگ رستم

دراین طرح به بررسی ویژگی‏های بیوشیمیایی آنزیم لیپاز ترموفیل و الکالوفیل جداشده از باکتری باسیلوس سوبتیلیس dr8806 موجود در فلور میکروبی چشمه آب گرم و معدنی دیگ رستم پرداخته می‏شود. آنزیم تولیدشده با استفاده از روش های رسوب دهی با سولفات آمونیوم و اولترافیلتراسیون تغلیظ و با کروماتوگرافی تعویض یونی q سفاروز خالص شد. وزن مولکولی این آنزیم براساس sds-page حدود 25/60 کیلودالتون است. آنالیز فعالیت آنزیم در شرایط مختلف نشان داد که دما و ph بهینه این آنزیم به ترتیب °c 50 و 8 و نیمه عمر آنزیم در دمای بهینه، 72 دقیقه است. اثر یون های فلزی بر روی میزان فعالیت نشان دهنده این است که یون های cu2+ ، mn2+ ، fe2+ ،co2+ ،hg2+ ، mg2+ و zn2+ اثر مهارکنندگی و یون هایca2+ ،k+ و na+ در غلظت 10 میلی‏مولار موجب پایداری فعالیت آنزیم استخراج شده می شوند. فعالیت آنزیم در اثرpmsf ,edta dntp ,sds ( 1 و 10 میلی مولار ) کاهش قابل ملاحظه ای نشان داد. ترکیب triton x-100 1% تاثیر چندانی بر فعالیت آنزیم نشان نداد. آنزیم بر روی ترکیب استری پارا- نیتروفنیل استات (pnpa) با طول زنجیره کربنی کوتاه، بیشترین فعالیت هیدرولیزی را نسبت به سایر سوبستراهای استری نشان داد. برای سوبسترای pnpa ،پارامترهای سینتیکی km وvmax به ترتیب 5 میلی‏مولار و ?m min? 1 mg? 1 25/149 تعیین شد. سرعت هیدرولیز استر های فلورسئین در حضور آنزیم خالص شده، افزایش نشان داد.